Mis vahe on otsese ja kaudse ELISA vahel - Erinevus-Vahel

Mis vahe on otsese ja kaudse ELISA vahel

The peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on see otseses ELISA-ga konjugeeritakse primaarset antikeha otseselt ensüümiga, samas kui kaudses ELISA-ga konjugeeritakse sekundaarne antikeha, mis on komplementaarne primaarse antikehaga. See tähendab, et otsene ELISA kasutab ühte antikeha, samas kui kaudne ELISA kasutab kahte antikeha.

Otsene ja kaudne ELISA on kaks ELISA meetodit (ensüümiga seotud immunosorbanttesti), mida kasutatakse spetsiifilise antigeeni või antikeha esinemise tuvastamiseks söötmes.

Kaetud peamised valdkonnad

1. Mis on otsene ELISA
- Mõiste, protseduur, omadused
2. Mis on kaudne ELISA
- Mõiste, protseduur, omadused
3. Millised on otsese ja kaudse ELISA vahelised sarnasused
- Ühiste omaduste ülevaade
4. Mis vahe on otsese ja kaudse ELISA vahel
- peamiste erinevuste võrdlus

Võtmesõnad

Otsene ELISA, tuvastamise ensüüm, kaudne ELISA, primaarne antikeha, sekundaarne antikeha, põhimik


Mis on otsene ELISA

Otsene ELISA on ELISA meetod, mis võimaldab antigeeni tuvastada ensüümiga seotud primaarse antikehaga. See ELISA meetod töötati esmalt välja Perlmann ja Engvall. Seda peetakse ELISA lihtsaimaks vormiks. Otsese ELISA etapid on loetletud allpool:

  1. Plaadi pind katmine prooviga;
  2. Plaadi inkubeerimine ensüümi konjugeeritud primaarse antikehaga;
  3. Pesemine seondumata antikehade eemaldamiseks plaadist;
  4. Ensümaatilise reaktsiooni jaoks vajaliku substraadi lisamine;
  5. Plaadilt saadud signaalide tuvastamine.

Siin on primaarse antikehaga konjugeeritud kaks peamist tüüpi ensüüme HRP (mädarõika peroksidaas) ja leeliseline fosfataas. Kolm tüüpi substraate, mida kasutatakse koos HRP-ga, on OPD (o-fenüleendiamiindivesinikkloriid), TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetrametüülbensidiin) ja ABTS (2, 2'-asinobis [3-etüülbensotiasoliin-6- sulfoonhappe] -diammoniumisool). Aluseline fosfataas koos kasutatava substraadiga on PNPP (p-nitrofenüülfosfaat, dinaatriumsool).Substraadi ensümaatiline reaktsioon põhjustab söötmes värvi muutuse, mis sõltub substraadi tüübist ja reaktsioonis kasutatavast ensüümist. See hõlbustab proovide tuvastamist sihtantigeeniga.


Joonis 1: Otsene ELISA

Otsene ELISA sobib suurema molekulmassiga antigeeni koguse määramiseks proovis. Selles ELISA meetodis on vähem etappe, mis muudab selle kiiremaks testiks. Primaarse antikeha ensüümide märgistamisega kaasneva maksumuse ja aja tõttu on otsese ELISA kasutamine üsna haruldane. Teisest küljest tekitab see ka negatiivset mõju sihtantigeenile.

Mis on kaudne ELISA

Kaudne ELISA on teine ​​ELISA meetod, mis kasutab avastamiseks kahte antikeha: primaarne ja sekundaarne antikeha. Kaudse ELISA etapid on järgmised:

  1. Plaadi pind katmine prooviga;
  2. Plaadi inkubeerimine primaarse antikehaga;
  3. Pesemine sidumata antikehade eemaldamiseks plaadist;
  4. Plaadi inkubeerimine detekteerimisensüümiga konjugeeritud sekundaarse antikehaga;
  5. Pesemine sidumata antikehade eemaldamiseks plaadist;
  6. Ensümaatilise reaktsiooni jaoks vajaliku substraadi lisamine;
  7. Plaadilt saadud signaalide tuvastamine.


    Joonis 2: Kaudne ELISA

Kaudne ELISA toimub kahe antikeha siduva etapi kaudu. Teisest küljest konjugeeritakse sekundaarne antikeha tuvastamise ensüümiga. Üldiselt on ensüümidega konjugeeritud palju sekundaarseid antikehi. Siin on sekundaarne antikeha peamiselt polüklonaalne, anti-liik-vastane antikeha. Ensüümkonjugeeritud antikehade olemasolu tõttu kasutatakse parasiitide, bakterite ja viiruste avastamiseks immunoloogilistes testides sagedamini kaudset ELISA meetodit. Teisest küljest võib plaadil primaarse antikehaga seonduda mitmete sekundaarsete antikehadega. Seetõttu on testi tundlikkus väga suur.

Otsese ja kaudse ELISA vahelised sarnasused

  • Otsene ja kaudne ELISA on kaks ELISA meetodit, milles huvipakkuv antigeen on otse plaadi külge kinnitatud.
  • Mõlemad meetodid hõlmavad konkreetse valgu molekuli olemasolu tuvastamist proovis. See valgu molekul on otse plaadi külge kinnitatud.
  • Mõlemas meetodis kasutatakse 96-augulisi plaate või 8-süvendilisi ribatorusid. Mõlemad plaadid ja torud on valmistatud polüstüreenist. 96-augulised plaadid annavad palju ruumi reaktsiooni optimaalse lahjenduse määramiseks. Vahepeal on 8-süvendilised riba-torud peenhäälestatud testide jaoks paremad.

Erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel

Määratlus

Otsene Elisa viitab ELISA tüübile, milles primaarne antikeha konjugeeritakse detekteerimise ensüümiga, samas kui kaudne ELISA viitab ELISA tüübile, milles sekundaarne antikeha konjugeeritakse detekteerimise ensüümiga.

Kasutatud antikehade arv

Otsene ELISA kasutab ühte antikeha, mis on primaarne antikeha, samas kui kaudne ELISA kasutab kahte antikeha, primaarset ja sekundaarset antikeha. See on peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel.

Avastamise ensüüm on seotud

Peale selle on detekteerimise ensüüm seotud primaarse antikehaga otseses ELISA-s, samal ajal kui tuvastamise ensüüm on seotud sekundaarse antikehaga kaudses ELISA-s.

Signaalide intensiivsus

Teine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on see, et otsese ELISA abil toodetud signaalid on vähem intensiivsed, samas kui kaudse ELISA abil toodetud signaalid on signaali võimendamise tõttu intensiivsemad.

Taustsignaalid

Otsene ELISA annab siiski rohkem taustsignaale kui kaudne ELISA.

Tundlikkus

Otsene ELISA on vähem tundlik, samas kui kaudne ELISA on tundlikum. See on ka vahetu ja kaudse ELISA vahel.

Ristreaktiivsus

Veel üks erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on ristreaktiivsus. See tähendab, et ristreaktiivsus on minimaalne otseses ELISA-s, samas kui see on kaudse ELISA puhul oluline.

Aeg

Lisaks on otsene ELISA vähem aeganõudev vähemate sammude tõttu, samas kui kaudne ELISA on aeganõudvam, kuna see on kahekordistunud antikehade sidumise etappide tõttu.

Kasutamise sagedus

Kuigi otsene ELISA on suhteliselt haruldane, on kaudne ELISA sagedasem.

Järeldus

Otsene ELISA kasutab spetsiifilise antigeeni tuvastamiseks ainult primaarset antikeha. See tähendab, et primaarne antikeha on konjugeeritud detekteerimisensüümiga otseses ELISA-s. Kuid kaudne ELISA kasutab primaarset antikeha antigeeniga seondumiseks, samas kui ensüümi konjugeeritud sekundaarne antikeha seondub primaarse antikehaga. Otsene ELISA on vähem levinud ensüümi konjugeeritud primaarse antikeha vähema kättesaadavuse tõttu. Peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on kasutatud antikehade arv.

Viide:

1. ELISA tüübid.Bio-Rad, Bio-Rad Laboratories,