Erinevus pöördfaasi ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia vahel - Erinevus-Vahel

Erinevus pöördfaasi ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia vahel

The peamine erinevus pöördfaasi ja hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia vahel on see, et pöördfaasi kromatograafia (RPC) kasutab hüdrofoobset keskkonda, mis viib tugevamatesse interaktsioonidesse, samas kui hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia (HIC) kasutab vähem hüdrofoobset keskkonda, kui seda kasutatakse pöördfaasilises kromatograafias söötmega..  

Pöördfaasi kromatograafia ja hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia on kaks kromatograafilist tehnikat, mis sõltuvad kromatograafilise keskkonna hüdrofoobsete pindade ja biomolekulide pinnal olevate hüdrofoobsete plaastrite vahelistest koostoimetest.

Kaetud peamised valdkonnad

1. Mis on pöördfaasi kromatograafia
- Määratlus, sammud, rakendused
2. Mis on hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia
- Määratlus, sammud, rakendused
3. Millised on sarnasused pöördfaasi kromatograafia ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia vahel
- Ühiste omaduste ülevaade
4. Milline on erinevus pöördfaasi kromatograafia ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia vahel
- peamiste erinevuste võrdlus

Võtmesõnad

Hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia, HIC, meedia, pöördfaasi kromatograafia, RPC


Mis on pöördfaasi kromatograafia

Pöördfaasi kromatograafia (RPC) on kromatograafiline meetod, mida kasutatakse biomolekulide nagu valkude, peptiidide ja oligonukleotiidide puhastamiseks ja analüüsimiseks. See annab eraldusvõime kõrge eraldusvõimega ja sobib ideaalselt peptiidide kaardistamiseks ja puhtuse kontrollimiseks. RPC-d kasutatakse sagedamini peptiidide ja oligonukleotiidide lõplikus poleerimises.

Statsionaarse faasina võib kasutada kahte peamist tüüpi hüdrofoobset keskkonda: süsinikahelaga kaetud ränidioksiidhelmed või palja hüdrofoobsed polümeerid. Kolonn täidetakse hüdrofoobse söötmega pakendatud voodi kujul, millele proov kantakse. Hüdrofoobsete interaktsioonide moodustumise suurendamiseks võib liikuvale faasile lisada iooniparistavat ainet nagu trifluoroäädikhape (TFA).Alguses kasutatakse orgaanilist modifikaatorit, näiteks 5% atsetonitriili, ja elueerimist võib alustada atsetonitriili protsendi suurendamisega.


Joonis 1: pöördfaasi kromatograafia teooria

Vähem hüdrofoobsed / polaarsemad biomolekulid elueeruvad kõigepealt, samas kui hüdrofoobsed molekulid elueeruvad hiljem. RPC on kõrgeima eraldusvõimega kromatograafiline tehnika.

Mis on hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia

Hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia (HIC) on teine ​​meetod, mida kasutatakse biomolekulide lahutamisel hüdrofoobsuse alusel mõõdukates tingimustes. See on ideaalne meetod valkude puhastamiseks, kui proovid tuleb algse proovikontsentratsiooni ja puhastamise käigus allutada ammooniumsulfaadi sadestamisele. Ammoonium-sulfaadi sadestamise ajal suurenenud soola tase suurendab hüdrofoobsete komponentide vahelist koostoimet.


Joonis 2: Kõrge soola kontsentratsiooni mõju hüdrofoobsetele interaktsioonidele

HIC-i hüdrofoobne keskkond koosneb sfääriliste osakeste inertsest maatriksist, mis on kaetud alküül- või arüülrühmi sisaldavate liganditega. Hüdrofoobsed interaktsioonid toimuvad mõõdukalt kõrge soolasisalduse juures (tavaliselt 1–2 M ammooniumsulfaat või 3 M NaCl). Stardipuhver tagab huvipakkuvate valkude sidumise söötmele, lisades lisandeid eemale. Elueerimispuhver sisaldab madala soola kontsentratsiooni, nõrgendades valkude ja statsionaarse faasi vahelist koostoimet.

Pöördfaasi kromatograafia ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia sarnasused

  • Pöördfaasi ja hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia on kaks meetodit, mida kasutatakse biomolekulide eraldamiseks nende hüdrofoobsuse alusel.
  • Mõlema meetodi liikuv faas on kas vesi või orgaaniline lahusti.
  • Nad kasutavad pakitud voodi veerge.
  • Startpuhver tagab soovitud molekulide seondumise kolonniga.
  • Madalaima hüdrofoobsusega molekulid võivad esmalt elueerida, samal ajal kui rohkem hüdrofoobseid molekule võib elueerida hiljem.
  • Lõplik pesemisetapp elueerib kõige tihedamalt seotud molekulid.
  • Mõlema meetodi lahutusvõime on kombinatsioon selektiivsusest (piikide eraldusastmest), efektiivsusest (võime toota kitsast, sümmeetrilist piiki), proovi massist ja retentsiooniajast.

Erinevus pöördfaasi kromatograafia ja hüdrofoobse interaktsioonikromatograafia vahel

Määratlus

Pöördfaasi kromatograafia (RPC) viitab kõrgeima lahutusvõimega eraldusmeetodile, mis põhineb molekulide hüdrofoobsusel segus, samal ajal kui hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia (HIC) viitab hüdrofoobsusel põhinevale eraldustehnikale, kuid toimib suhteliselt kergetes tingimustes.

Hüdrofoobsus

RPC töötab hüdrofoobsetes tingimustes, samas kui HIC töötab suhteliselt kergetel hüdrofoobsetel tingimustel.

Koostoimed

Pöördfaasi kromatograafia toob kaasa tugevamad molekulide ja statsionaarse faasi vahelised interaktsioonid, mis tuleb orgaanilise modifikaatoriga elueerimise ajal ümber pöörata, samal ajal kui HIC viib mõõdukalt kõrge interaktsioonini statsionaarse faasi ja molekulide vahel.

Hüdrofoobne meedia

RPC kasutab süsinikahelaga kaetud silikageeli või paljaid hüdrofoobseid polümeere, samas kui HIC kasutab inertset sfääriliste osakeste maatriksit, mis on kaetud alküül- või arüülrühmi sisaldavate liganditega.

Alusta puhvrit

RPC lähtepuhvris kasutatakse trifluoroäädikhapet (TFA), samas kui HIC-i algpuhver kasutab mõõdukalt kõrget soolasisaldust.

Elutsioon

Atsetonitriili suurenenud protsent alustab elueerimist RPC-s, samal ajal kui alandav soolakontsentratsioon alustab elueerimist HIC-s.

Resolutsioon

Pöördfaasi kromatograafia on kõrgeima lahutusvõimega kromatograafiline tehnika, kusjuures HIC-i lahutusvõime on RPC-ga võrreldes madal.

Rakendused

RPC-d kasutatakse valkude, peptiidide ja oligonukleotiidide eraldamiseks, samas kui HIC-d kasutatakse peamiselt valkude puhastamisel.

Järeldus

Pöördfaasi kromatograafia on kõrgeima lahutusvõimega kromatograafiline tehnika, mis toimib väga hüdrofoobsetes tingimustes. Kuid HIC tegutseb mõõdukates hüdrofoobsetes tingimustes. RPC ja HIC on kahte tüüpi hüdrofoobsusel põhinevad eraldusmeetodid. Peamine erinevus RPC ja HIC vahel on igas meetodis kasutatud hüdrofoobsuse aste.

Viide:

1. Hüdrofoobne koostoime ja pöördfaasi kromatograafia: põhimõtted ja meetodid. GE Healthcare, 2006.